Interakcja genotypu czynnika neurotropowego pochodzenia mózgowego Val66Met i historii stresu w regulacji hamowania przedwczesnego u myszy

Wywołany przez mózg polimorfizm czynnika neurotropowego (BDNF) Val66Met powoduje zmniejszone zależne od aktywności uwalnianie BDNF i jest zaangażowany w schizofrenię. Jednak wpływ polimorfizmu na funkcjonalne działanie związane z receptorami dopaminergicznymi i N- metylo- d- aspartanem (NMDA) pozostaje niejasny. Zastosowaliśmy hamowanie przedruchowe, miernik bramkowania sensomotorycznego, który jest zaburzony w schizofrenii, i oceniano skutki ostrego leczenia agonistą receptora dopaminy, apomorfiną (APO) i antagonistą receptora NMDA, MK-801. Użyliśmy dorosłych, humanizowanych myszy knockin hBDNF Val66Met , które wyrażają genotyp Val / Val, Val / Met lub Met / Met. Continue reading „Interakcja genotypu czynnika neurotropowego pochodzenia mózgowego Val66Met i historii stresu w regulacji hamowania przedwczesnego u myszy”

Konstytucyjna aktywacja katalitycznej jednostki PKA w zespole nadnerczy AD 6

Funkcjonalna charakterystyka wariantów PRKACA. Panel A pokazuje strukturę wyprowadzoną z tetrameru kinazy białkowej A (PKA), z niezmutowaną katalityczną podjednostką (C?) przedstawioną na zielono i regulacyjną podjednostką (RII?) przedstawioną na czerwono. Wyświetlany jest powiększony widok na obszar Leu206 w podjednostce C. Leu206 jest przedstawiony jako wypełniająca przestrzeń reprezentacja; dwie reszty w bliskim sąsiedztwie (Val115 i Tyr228) i dodatkowe reszty z miejsca hamującego (Arglll-Ser114, oznaczone gwiazdką) podjednostki regulacyjnej są przedstawione jako pałeczki. Continue reading „Konstytucyjna aktywacja katalitycznej jednostki PKA w zespole nadnerczy AD 6”

Konstytucyjna aktywacja katalitycznej jednostki PKA w zespole nadnerczy AD 5

Panel C pokazuje ideogram chromosomu 19 z genami zawartymi w paśmie p13.2-p13.12 (GRCh37 / h19). Czarne bloki reprezentują rozmiar i położenie duplikacji. Szare bloki reprezentują geny zawarte tylko we współużytkowanym regionie duplikacji. Czerwony blok reprezentuje PRKACA. Continue reading „Konstytucyjna aktywacja katalitycznej jednostki PKA w zespole nadnerczy AD 5”

Transfekcja i obrazowanie metoda FRET

Transfekcję i obrazowanie metodą FRET przeprowadzono jak opisano wcześniej25. Zastosowano równomolowe stężenia przepuszczalnej dla komórek pary synergicznych analogów cAMP do aktywacji PKA II.26. Kwantyfikacja aktywności enzymatycznej PrKACA i enzymu PKA
Lizaty całych komórek lub tkanek badano pod kątem ekspresji podjednostek PKA C? za pomocą Western blotting z użyciem specyficznego przeciwciała (sc-903, Santa Cruz Biotechnology). Komórki COS-7 transfekowano za pomocą X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent (Roche) i 500 ng plazmidowego DNA na studzienkę przez 24 godziny. Continue reading „Transfekcja i obrazowanie metoda FRET”