Konstytucyjna aktywacja katalitycznej jednostki PKA w zespole nadnerczy AD 5

Panel C pokazuje ideogram chromosomu 19 z genami zawartymi w paśmie p13.2-p13.12 (GRCh37 / h19). Czarne bloki reprezentują rozmiar i położenie duplikacji. Szare bloki reprezentują geny zawarte tylko we współużytkowanym regionie duplikacji. Czerwony blok reprezentuje PRKACA. Continue reading „Konstytucyjna aktywacja katalitycznej jednostki PKA w zespole nadnerczy AD 5”

Transfekcja i obrazowanie metoda FRET

Transfekcję i obrazowanie metodą FRET przeprowadzono jak opisano wcześniej25. Zastosowano równomolowe stężenia przepuszczalnej dla komórek pary synergicznych analogów cAMP do aktywacji PKA II.26. Kwantyfikacja aktywności enzymatycznej PrKACA i enzymu PKA
Lizaty całych komórek lub tkanek badano pod kątem ekspresji podjednostek PKA C? za pomocą Western blotting z użyciem specyficznego przeciwciała (sc-903, Santa Cruz Biotechnology). Komórki COS-7 transfekowano za pomocą X-tremeGENE HP DNA Transfection Reagent (Roche) i 500 ng plazmidowego DNA na studzienkę przez 24 godziny. Continue reading „Transfekcja i obrazowanie metoda FRET”

Pacjenci z zespolem Cushinga

Pacjentów sklasyfikowano jako mających jawny zespół Cushinga, jeśli mieli co najmniej trzy nieprawidłowe wyniki testów biochemicznych lub jeśli mieli typowe cechy kataboliczne (tj. Osłabienie mięśni, kruchość skóry i osteoporozę) plus co najmniej dwa nieprawidłowe wyniki testów biochemicznych. Uważano, że pacjenci mają endokrynne nieczynne zmiany nadnerczowe, jeśli mieli prawidłowe wyniki biochemiczne i brak objawów katabolicznych. Wszyscy pacjenci, którzy nie mieli objawów katabolicznych, ale mieli co najmniej jeden nieprawidłowy wynik w wyżej wymienionych badaniach, zostali sklasyfikowani jako mający subkliniczny zespół Cushinga. Continue reading „Pacjenci z zespolem Cushinga”

Konstytucyjna aktywacja katalitycznej jednostki PKA w zespole nadnerczy

Zespół Cushinga niezależny od kortykotropiny jest spowodowany przez nowotwory lub rozrost kory nadnerczy. Molekularna patogeneza gruczolaków nadnercza wytwarzających kortyzol nie jest dobrze poznana. Metody
Przeprowadziliśmy sekwencjonowanie exome próbek tkanek nowotworowych od 10 pacjentów z gruczolakami nadnercza wytwarzającymi kortyzol i ocenialiśmy nawracające mutacje w genach kandydujących u dodatkowych 171 pacjentów z guzami kory nadnerczy. Przeprowadzono również analizę liczby kopii genomewidu u 35 pacjentów z hiperplazjami kory nadnerczy wydzielającymi kortyzol. Continue reading „Konstytucyjna aktywacja katalitycznej jednostki PKA w zespole nadnerczy”

Dostosowanie dawki ze wzgledu na wiek lub czynnosc nerek

Nie jest konieczne dostosowanie dawki ze względu na wiek lub czynność nerek ani u pacjentów z umiarkowanymi zaburzeniami czynności wątroby. W dwóch wcześniejszych badaniach fazy 3 orytawancyny w leczeniu ostrych zakażeń bakteryjnych skóry i struktury skóry, w których podawano orytawancynę raz na dobę przez 3 do 7 dni, zgromadzone dane nie dostarczyły istotnych dowodów na ogólną skuteczność i w podgrupie pacjentów zakażonych MRSA. Ponieważ profil farmakokinetyczno-farmakodynamiczny orytawancyny pozwala na leczenie pojedynczą dawką, 26, 27 przedstawione tu badanie fazy 3 (SOLO I) zaprojektowano w celu oceny skuteczności i bezpieczeństwa pojedynczej dawki orytawancyny w porównaniu do schematu codziennie wankomycyna przez 7 do 10 dni u dorosłych z ostrą infekcją bakteryjną skóry i zakażeniami struktury skóry. Metody
Projekt badania
SOLO I było międzynarodowym, randomizowanym, prowadzonym metodą podwójnie ślepej próby, w celu porów nania skuteczności i bezpieczeństwa pojedynczej dożylnej dawki orytawancyny z dożylnym dawkowaniem wankomycyny przez 7 do 10 dni u dorosłych z ostrą infekcją bakteryjną skóry i skórnymi infekcjami skóry (zakażenie rany , zapalenie tkanki łącznej lub główny ropień skórny). Continue reading „Dostosowanie dawki ze wzgledu na wiek lub czynnosc nerek”

Orytawancyna

Orytawancyna jest lipoglikopeptydem o działaniu bakteriobójczym wobec bakterii Gram-dodatnich. Jego zależna od stężenia aktywność i przedłużony okres półtrwania pozwalają na stosowanie pojedynczej dawki. Metody
Przeprowadziliśmy randomizowaną, podwójnie zaślepioną próbę, w której dorośli z ostrą infekcją bakteryjną skóry i zakażeniami struktury skóry otrzymywali pojedynczą dożylną dawkę 1200 mg orytawancyny lub schemat dożylnej wankomycyny dwa razy na dobę przez 7 do 10 dni. Trzy punkty końcowe skuteczności zostały przetestowane pod kątem nie gorszej jakości. Continue reading „Orytawancyna”

Konstytucyjna aktywacja katalitycznej jednostki PKA w zespole nadnerczy AD 9

Odkrycia wskazują, że subkliniczny zespół Cushinga nie jest wczesną postacią jawnej choroby, ale patofizjologicznie odrębną istotą. Ponieważ PRKACA pośredniczy w większości efektów inaktywacji mutacji PRKAR1A32 i ponieważ mutacje PRKAR1A są związane z różnymi nowotworami u ludzi i myszy, 33,34 spekulujemy, że somatyczne defekty PRKACA mogą również odgrywać rolę w innych postaciach endokrynnych i nieendokrynnych. guzy. PKA, zależna od cAMP kinaza serynowo-treoninowa, jest prawdopodobnie najlepiej scharakteryzowaną kinazą białkową i stanowi wyraźny przykład regulacji allosterycznej.35 W stanie nieaktywnym jest to tetrameryczny holoenzym składający się z dimeru dwóch podjednostek regulatorowych i dwóch katalitycznych; w warunkach fizjologicznych aktywność PKA jest indukowana przez receptory sprzężone z białkiem G poprzez zwiększone poziomy cAMP.23,35 Po wiązaniu cAMP, podjednostki regulacyjne dysocjują z podjednostek katalitycznych, umożliw iając enzymowi aktywację.35 Chociaż niektóre losowo wprowadzone Wykazano, że mutacje w PRKACA powodują niekontrolowaną katalityczną aktywację in vitro, 36 takich zmian nie powiązano z ludzką chorobą. Continue reading „Konstytucyjna aktywacja katalitycznej jednostki PKA w zespole nadnerczy AD 9”

Konstytucyjna aktywacja katalitycznej jednostki PKA w zespole nadnerczy AD 8

W grupie pacjentów z jawnym zespołem Cushinga obecność mutacji PRKACA wiązała się z bardziej ostrym fenotypem. Odpowiednio, poziomy ekspresji różnych enzymów steroidogennych w zmutowanych tkankach gruczolaka były wyższe w obecności mutacji PRKACA. Nie było oczywistych fenotypowych różnic między pacjentami z powieleniem linii płciowej PRKACA a tymi bez powielania, chociaż liczba pacjentów z powieleniem była mała. Dotknięta chorobą matka i syn mieli łagodny zespół Cushinga o podstępnym początku, spowodowany obustronnym przerostem makronodularnym przejawiającym się w trzeciej i czwartej dekadzie życia. Continue reading „Konstytucyjna aktywacja katalitycznej jednostki PKA w zespole nadnerczy AD 8”

Konstytucyjna aktywacja katalitycznej jednostki PKA w zespole nadnerczy AD 7

Po kotransfekcji nadmiarem niezmydlającego RII, podstawowa aktywność PKA była zmniejszona w komórkach transfekowanych niezmutowanym Ca i reagowała na analogi cAMP, podczas gdy aktywność PKA w komórkach transfekowanych mutantami pozostawała wysoka i nie reagowała na analogi cAMP. To odkrycie wskazuje, że mutacje spowodowały, że podjednostka katalityczna jest odporna na supresję fizjologiczną przez podjednostkę regulatorową. Brak supresji utrzymywał się, gdy ta sama ilość nieututującego C? była kotransfekowana, wskazując na dominujący efekt mutacji (figura 2D). Podobnie, transfekcja zmutowanego wariantu C? Leu206Arg powodowała znaczny wzrost aktywności PKA w warunkach podstawowych, tak że aktywność PKA była w tym samym zakresie, co w komórkach transfekowanych nieututującym C? przy stymulacji cAMP, i ta aktywność nie była tłumiona przez kotransfekcję z RII?, co ponownie wskazuje na brak supresji aktywności zmutowanej katalitycznej podjednostki pr zez regulacyjną podjednostkę (Figura 2E). Continue reading „Konstytucyjna aktywacja katalitycznej jednostki PKA w zespole nadnerczy AD 7”

Choroba i wyniki kliniczne u pacjentów z Ebolą w Sierra Leone AD 2

Tutaj przedstawiamy dostępne dane dotyczące pierwszych 106 pacjentów, u których zdiagnozowano EVD, gdy choroba rozprzestrzeniła się na Sierra Leone, aby zapewnić podstawę do zrozumienia choroby klinicznej. Metody
Pacjenci
Przed wykryciem EVD w Sierra Leone pacjenci zostali skierowani do szpitala Kenema Government Hospital w celu przeprowadzenia badań i leczenia, jeśli mieli chorobę spełniającą definicję podejrzewanego przypadku Lassa.11 Po wykryciu pierwszych przypadków EVD pacjenci zostali skierowani, jeśli przedstawiono chorobę, która spełniała definicję przypadku Światowej Organizacji Zdrowia dla EVD.13
Zbieranie danych
Wszystkie kliniczne i laboratoryjne formularze do zbierania danych były używane w szpitalu Kenema Government Hospital w celu leczenia pacjentów z wirusową gorączką krwotoczną przed epidemią EVD. Ponadto wprowadzono protokół pobierania krwi w celu uzyskania próbek, jeśli uznał to za stosowny lekarz prowadzący, od wszystkich pacjentów przyjętych na oddział. Dane demograficzne, kliniczne i dane dotyczące leczenia rejestrowano na standardowych formularzach, które utrzymywano poza oddziałem, a następnie łączono i analizowano po zwolnieniu wszystkich pacjentów w tej kohorcie.
Analiza metaboliczna
Próbki surowicy analizowano za pomocą biochemicznego analizatora krwi Piccolo i kompleksowych dysków z odczynnikami metabolicznymi (Abaxis), zgodnie z zaleceniami producenta. Przeprowadzono pomiary metaboliczne, które obejmowały poziomy sodu, potasu, całkowitego dwutlenku węgla, chlorków, glukozy, wapnia, azotu mocznikowego we krwi, kreatyniny, fosfatazy alkalicznej, aminotransferazy alaninowej (ALT), aminotransferazy asparaginianowej (AST), bilirubiny całkowitej, albuminy i totalna proteina.
EBOV Diagnostics, Viral Load i Genomics
Próbki pobraliśmy przy użyciu protokołów zbiórki i przetwarzania w szpitalu rządowym w Kenema zgodnie z wytycznymi ratownictwa medycznego ustanowionymi przez Ministerstwo Zdrowia i Sanitaryzacji Sierra Leone. Continue reading „Choroba i wyniki kliniczne u pacjentów z Ebolą w Sierra Leone AD 2”